بیان پروتئین کایمریک tir ، intimin از باکتریe.coli o157 در گیاه تراریخت و ارزیابی اثرات ایمونولوژیکی آن در مدل حیوانی

اشریشیاکلی سویه o157:h7 یکی از مهمترین پاتوژن های تولید کننده بیماری کولیت خونریزی دهنده در انسان می باشد. دام های اهلی اصلی ترین مخزن این باکتری بوده و بکارگیری واکسن بر علیه آن یکی از مهمترین را ه های پیشگیری این باکتری می باشد. پروتئین های intimin، tir و espa مهمترین فاکتورهای بیماریزایی این باکتری به حساب می آیند که توسط ژن های جزیره پاتوژنسیته lee تولید می شوند. پروتئین espa از پروتئین هایی است که در ساخت کانال ارتباطی در سیستم ترشحی نوع iii نقش داشته و مانند یک رابط سبب انتقال پروتئین tir به سلول میزبان می شود و در نهایت پروتئین intimin با اتصال به tir اتصال محکم و اختصاصی باکتری به سلول میزبان را سبب می شود. این اتصال باعث ایجاد ضایعه تخریب دیواره سلول یا a/e میزبان می گردد. فرضیه انجام تحقیق بر این اصل است که تولید دو عامل بیماریزا از سه مورد فوق به صورت کایمریک و به عنوان یک ایمونوژن خوراکی می تواند با تحریک مناسب سیستم ایمنی میزبان مانع کلونیزاسیون باکتری e. coli o157:h7 در حیوان شود. برای این منظور یک سازه ژنی حاوی قسمت های ایمنی زایeae (i) وtir (t) با استفاده از یک رابط پپتیدی به یکدیگر متصل و ژن آن به طور مصنوعی ساخته شد. این ژن مصنوعی براساس کدون های گیاه بهینه سازی و سپس تحت کنترل پروموتر camv35s در ناقل بیانی گیاه جهت بیان درون گیاه تنباکو کلون شد. در نهایت این گیاهان تراریخت حاوی این ایمونوژن دو گانه جهت بررسی ایمنی زایی به حیوان مدل به صورت خوراکی داده شد و سپس خون حیوان برای بررسی انتی بادی های تولید شده تحت آنالیزهای مولکولی قرار گرفت.